روش برادفورد برای تعیین غلظت پروتئین‌ها

تعیین غلظت کلی پروتئین درون محلول‌ها، یک نیاز اساسی در بسیاری از آزمایشگاه‌های بیوشیمیایی و کنترل کیفیت‌های صنعتی می‌باشد. از روش‌های سریع و به نسبت دقیق برای اندازه گیری این کمیت، می‌توان به متدهای مبتنی بر تغییر رنگ (Colorimetric methods) مانند روش برادفورد اشاره کرد. عموما به این صورت است که یک محلول استاندارد از واکنشگر خاصی به محلول مجهول اضافه می‌شود و در خلال یک سری واکنش‌ها با پروتئین ها، فراورده‌ای تولید می‌شود که رنگی است. شدت این رنگ رابطه مستقیمی با غلظت پروتئین نمونه دارد. بنابراین با استفاده از اندازه گیری‌های طیف‌سنجی و تشکیل منحنی کالیبراسیون می‌توانیم غلظت پروتئین نمونه مجهول را با دقت مناسبی تخمین بزنیم.

روش برادفورد یکی از همین روش هاست. اساس این روش اتصال رنگ Coomassie Brilliant Blue به پروتئین است. هنگامی که این ماده رنگی به پروتئین متصل می‌شود، حداکثر Absorption در طول موج ۵۹۵ نانومتری مشاهده می‌شود. از ویژگی‌های مثبت این روش، این است که اولا ریجنت آن به سادگی قابل تهیه است و ثانیا واکنش به شدت سریع رخ می‌دهد و رنگ تولید شده تا مدت زیادی پایدار باقی می‌ماند. میزان دقت این روش حدود 20μg/cm3 بوده و لازم به ذکر است که شدت رنگ بوجود آمده تا حدی وابسته به توالی پروتئین موجود در محلول (خصوصا به میزان آمینواسیدهای بازی آرژینین و لایزین) می‌باشد.

در ادامه شیوه عملی انجام روش برادفورد را مشاهده می‌کنید.