کارگاه Real time PCR

واکنش زنجیره‌ای پلیمراز بی‌درنگ (به انگلیسی: real-time polymerase chain reaction) که مخفف آن (RT-PCR) است یا همچنین واکنش زنجیره‌ای پلیمراز کمّی (به انگلیسی: quantitative polymerase chain reaction) یک روش آزمایشگاهی زیست‌شناسی مولکولی برپایهٔ واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) است. این واکنش همانند PCR معمولی، بر تکثیر مولکول دی‌ان‌ای هدف نظارت می‌کند ولی در نهایت، به نتیجه یکسانی نمی‌رسد. محدودیت سیستم PCR معمولی، عدم توانایی بررسی کمی میزان بیان یک ژن است که واکنش زنجیره‌ای پلیمراز کمی برای انجام این هدف تعریف شده‌است.

دو روش معمول برای تشخیص محصولات این واکنش وجود دارد. یکی رنگ‌های فلورسنت غیراختصاصی که با هر دی‌ان‌ای دو رشته‌ای پیوند بر قرار می‌کنند و دیگری کاوشگرهای دی‌ان‌ای اختصاصی که دنباله‌ای از اولیگونوکلئوتیدهای دارای گزارشگر فلورسنس هستند که تشخیص آن‌ها تنها پس از پیوندزنی کاوشگر با دنبالهٔ مکمل آن امکان‌پذیر است.

واکنش زنجیره‌ای پلیمراز کمی با استفاده از فلورسانس تحت نظارت واکنش زنجیره‌ای پلیمراز رونویسی معکوس برای تجزیه و تحلیل بیان ژن و تعیین مقدار آران‌ای ویروسی در محیط‌های تحقیقاتی و بالینی مورد استفاده قرار می‌گیرد. ارتباط تنگاتنگ بین روش‌های کمی و معکوس باعث شده‌است تا از واژه کمی به معنای معکوس استفاده شود. چنین استفاده ای ممکن است گیج کننده باشد. واکنش کمی بدون واکنش معکوس، برای تعیین تعداد کمی یک قطعه خاص از دی‌ان‌ای به کار می‌رود. در مقابل، واکنش معکوس به تنهایی می‌تواند برای فعال سازی همتاسازی مولکولی، توالی‌یابی یا تشخیص ساده آران‌ای به کار رود.

محورهای آموزشی کارگاه:

• مقدمه ای بر PCR وتفاوت آن با qpcr Real time
• آشنایی با دستگاه ABI و نحوه برنامه دادن به دستگاه آنالیز بیان ژن
• مراحل و اجزایReal time PCR
• ژن های رفرانس( reference genes)
• ارزیابی منحنی ها( Amplification plot and melt curve
• خطایابی Real time PCR
• آنالیز بیان ژن
• نکات مهم و کاربردی هنگام انجام Real time PCR